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上海安譜解析薄層色譜TLC操作要點(diǎn)

更新時(shí)間:2014-11-06      點(diǎn)擊次數(shù):2103
   

薄層色譜TLC操作要點(diǎn)

   鋪板

  鋪板用的勻漿不宜過稠或過?。哼^稠,板容易出現(xiàn)拖動(dòng)或停頓造成的層紋;過稀,水蒸發(fā)后,板表面較粗糙。勻漿配比一般是硅膠G:水=1:2~3,硅膠G:羧甲基纖維素鈉水溶液=1:2。研磨勻漿的時(shí)間,根據(jù)經(jīng)驗(yàn)來定,與空氣濕度有關(guān),一般通過拿起研棒時(shí)勻漿下滴的情況來判斷,越稠越難下滴。勻漿的稀稠除影響板的平滑外,也影響板涂層的厚度,進(jìn)一步影響上樣量。涂層薄,點(diǎn)樣易過載;涂層厚,顯色不那么明顯。通常,板的質(zhì)量對(duì)薄層鑒別的影響不是很大,影響zui大的是展開劑的配制和展開系統(tǒng)的飽和。

  點(diǎn)樣

  盡量用小的點(diǎn)樣管。如果有足夠的耐性,只用1微升的點(diǎn)樣管。這樣,點(diǎn)的斑點(diǎn)較小,展開的色譜圖分離度好,顏色分明。樣品溶液的含水量越小越好,樣品溶液含水量大,點(diǎn)樣斑點(diǎn)擴(kuò)散大。樣品溶液的溶劑一般是無水乙醇、甲醇、氯仿、乙酸乙酯。點(diǎn)好樣的薄層板用電吹風(fēng)的熱風(fēng)吹干或放入干燥器里晾干。

  展開劑配制

  選擇合適的量器把各組成溶劑移入分液漏斗,強(qiáng)烈振搖使混合液充分混勻,放置,如果分層,取用體積大的一層作為展開劑。不應(yīng)該把各組成溶液倒入展開缸,振搖展開缸來配制展開劑?;旌喜痪鶆蚝蜎]有分液的展開劑,會(huì)造成層析的*失敗。各組成溶劑的比例準(zhǔn)確度對(duì)不同的分析任務(wù)有不同的要求,盡量達(dá)到實(shí)驗(yàn)室儀器的zui高度,比如:取1ml的溶劑,應(yīng)使用1ml的單標(biāo)移液管,移液管應(yīng)符合計(jì)量認(rèn)證要求,盡管多數(shù)時(shí)候這不是必須的。

  展開系統(tǒng)的飽和

  一般使用的是雙槽的展開缸,一槽用來放展開劑,另一槽可加入氨水或硫酸。把待展開的板放入兩槽間的平臺(tái),斜架著,蓋上展開缸的蓋子。讓展開劑的蒸氣充滿展開缸,并使薄層板吸附蒸氣達(dá)到飽和,防止邊沿效應(yīng),飽和時(shí)間在半個(gè)小時(shí)左右。展開時(shí)難免要打開蓋子把薄層板放入展開劑中,不過對(duì)薄層板與蒸氣的吸附平衡影響不大,當(dāng)然動(dòng)作應(yīng)該盡量輕、快。

  溫濕度的控制

  溫濕度對(duì)薄層影響都很大。不凍結(jié)的前提下,通常溫度越低分離越好,較難的分離需在低溫下分離,例如人參皂苷。濕度的影響,估計(jì)主要是影響薄層板的吸附能力,導(dǎo)致選擇性(容量因子)的變化,濕度應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況確定。溫度控制使用空調(diào)器或冰柜,濕度控制是通過在另一展開槽放置相應(yīng)濃度的硫酸。

  顯色

  噴顯色劑顯色zui重要是有好的霧化器。
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